大鼠直腸上皮細胞操作要點(diǎn)：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶?jì)?，補加適量的培養基，輕輕晃動(dòng)細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀(guān)察細胞貼壁生長(cháng)情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長(cháng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進(jìn)行后續的實(shí)驗。

保存和應用:客戶(hù)可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶(hù)收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進(jìn)行后續的實(shí)驗操作。如是凍存細胞,客戶(hù)收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于。

U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細胞

Hep G2, 人肝癌細胞系

PC-12(高分化)，PC12，大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細胞株(高分化)

GH3, 大鼠垂體生長(cháng)激素腺瘤

Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞

QBC-939, 人膽管癌細胞

B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉移細胞

SGC-7901, 人胃腺癌細胞系

SK-N-SH, 人神經(jīng)母細胞瘤細胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

A549, 人肺癌細胞系

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

WM35, 人黑色素瘤細胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

WM451, 人黑色素瘤細胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌

Hela, 人宮頸癌細胞系