本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人骨特異性堿性磷酸酶水平。用純化的人骨特異性堿性磷酸酶抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入骨特異性堿性磷酸酶，再與HRP標記的骨特異性堿性磷酸酶抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的骨特異性堿性磷酸酶呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中人骨特異性堿性磷酸酶濃度。

　　ALP-B Elisa Kit使用要求如下：

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

　　各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數?！　》獍迥ぶ幌抟淮涡允褂?，以避免交叉污染。底物請避光保存。

　　嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。