細胞受殺傷性藥物作用以后，可能出現多方面反應，細胞的形態(tài)和增殖生長(cháng)的變化是晟易于顯現的。檢測藥物對細胞增殖的影響情況可用于測試藥物效應的研究。本節介紹的藥物對細胞增殖影響的實(shí)驗主要包括繪制生長(cháng)曲線(xiàn)的細胞培養實(shí)驗、成集落的細胞培養實(shí)驗、有絲分裂指數測定的細胞培養實(shí)驗、縮時(shí)電影顯微攝像術(shù)的細胞培養實(shí)驗。

一、繪制生長(cháng)曲線(xiàn)的細胞培養實(shí)驗

(一)試驗原理

    繪制培養細胞的生長(cháng)曲線(xiàn)可計數細胞增長(cháng)的數值，從而直觀(guān)地了解細胞生長(cháng)與死亡的動(dòng)態(tài)變化。常用于檢測藥物、培養液的成分和血清等對細胞生長(cháng)的影響。

(二)材料

1．待檢材料(藥物)。

2．細胞培養成層的貼壁細胞。

3．試劑 0．25％溶液、O．02％EDTA溶液、培養基(RPMll640或DMEM)、小牛血清、Hanks液。

4．器材25ml培養瓶、CO2培養箱、倒置顯微鏡、微量加樣器、血細胞計數板、對數坐標紙。

(三)買(mǎi)驗方法

1.配制EDTA細胞分離液(消化液)，將0．25％溶液與等量目0．02%EDTA溶液混合而成。

2．將單層培養的細胞用細胞消化液進(jìn)行消化，使之成為lml的細胞懸液。

3.待檢藥物處理細胞將待檢藥物稀釋至合適作用濃度，向細胞懸液中加人一定量稍檢藥物作用8 h以上。

4.用Hanks液稀釋成10ml，取少量置血細胞計數板內計數。將細胞懸液調節成(1～3)×105／ml，分別接種于25ml培養瓶中(根據實(shí)驗需要決定接種瓶數及每瓶接種的數量)。

5．每天每組取3瓶計數，計算均值，連續計數7d。

(四)結果與分析

    用對數坐標紙，以細胞濃度為縱坐標，天數為橫坐標，繪制生長(cháng)曲線(xiàn)。

(五)注意事項

1.用懸浮培養細胞進(jìn)行此項實(shí)驗，除不用消化外，其余操作步驟均相同。但需離心收集細胞，再用Hanks液吹打成細胞懸液，然后計數。

2.在計數細胞期問(wèn)，一般不更換培養液。若必須更換，實(shí)驗組與對照組均同樣更換。

3．每天細胞計數均應在相同時(shí)間進(jìn)行，以便減少實(shí)驗誤差。

4.由于計數的誤差和細胞在操作過(guò)程中丟失或死亡等因素的影響，應利用進(jìn)入生長(cháng)狀態(tài)的細胞進(jìn)行實(shí)驗。除了進(jìn)行此項實(shí)驗外，一般應再做分裂指數測定、成集落實(shí)驗等，互相參考。