ELISA檢測試劑盒技術(shù)
應用定性?shī)A心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì )與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結合物就會(huì )與*次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì )發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會(huì )發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長(cháng): 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽(yáng)性。
elisa技術(shù)流程
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過(guò)反應而結合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。
然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個(gè)環(huán)節的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。