紙層析法的基本原理及操作方法

17羥孕酮Elisa試劑盒紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。

層析溶劑由有機溶劑和水組成。

物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf 值(比移)來(lái)表示的：

R=原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離

原點(diǎn)到溶劑前沿的距離

在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf 值是常數。Rf 值的大小與物質(zhì)的結構、性質(zhì)、溶劑系統、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗17羥孕酮Elisa試劑盒利用紙層析法分離氨基酸。

器材

1、層析缸① 2、毛細管3、噴霧器4、培養皿

5、層析濾紙(新華一號)

試劑

1、擴展劑

是4 份水飽和的正丁醇和1 份醋酸的混合物。將20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入分液漏斗中，與15mL 水混合，充分振蕩，靜置后分層，放出下層水層。取漏斗內的擴展劑約5mL 置于小燒杯中做平衡溶劑，其余的倒入培養皿中備用.

2、氨基酸溶液0.5%的賴(lài)氨酸、、、苯、溶液及它們的混合液(各組份濃度均為0.5%)。各5mL

3、顯色劑50~100mL

0.1%水合茚三銅正丁醇容液。

操作

1、將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中。

2、取層析濾紙(長(cháng)22cm、寬14cm)一張。在紙的一端距邊緣2~3cm處用鉛筆劃一條直線(xiàn)，在此直線(xiàn)上第間隔2cm 作一記號如右圖。

3、點(diǎn)樣用毛細管將各種氨基酸樣品分別點(diǎn)在這6 個(gè)位置上，干后再點(diǎn)一次。每點(diǎn)在紙上擴散的直徑zui大不超過(guò)3mm。

4、擴展用線(xiàn)將濾紙縫成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將盛有約20mL擴展劑的培養皿建迅速置于密閉的層析缸中，并將濾紙直立于培養皿中(點(diǎn)樣的一端在下，擴展劑的液面需你于點(diǎn)樣線(xiàn)1cm)。待溶劑上升15~20cm 時(shí)即取出濾紙，自然干燥或用吹風(fēng)機熱風(fēng)吹干。

5、顯色用噴霧器均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5 分鐘(100℃)或用熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點(diǎn)。

6、17羥孕酮Elisa試劑盒計算各種氨基酸的Rf 值。