苛養木桿菌PCR試劑盒使用流程
苛養木桿菌PCR試劑盒將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
使用流程:
1. 整個(gè)檢測過(guò)程應嚴格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進(jìn)行操作,各區實(shí)驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實(shí)驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區應該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗后立即上機檢測;樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3. 每次實(shí)驗應該設置陰、陽(yáng)性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽(yáng)性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區,并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進(jìn)行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數應按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
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