人參源性成分探針?lè )晒舛縋CR試劑盒原理簡(jiǎn)述如下:

1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個(gè)報告熒光基團和一個(gè)淬滅熒光基團。探針完整時(shí),報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的*技術(shù)平臺。

2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì )發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結合,因此可以通過(guò)溶解曲線(xiàn),確定PCR反應是否特異。

3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會(huì )產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過(guò)程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

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