D2D Elisa 試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

　　應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。

　　D2D Elisa 試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度。

　　D2D Elisa 試劑盒常壓滅菌操作要點(diǎn):

　　(1)進(jìn)鍋不擠壓：擺放待滅菌的菌種袋必須分層，每層菌種袋不可擺太擠，要留一定空隙，不能相互擠壓。不適宜將菌種袋臥疊，要分層立放，以保證蒸汽暢流和接種穴完好。為了避免棉塞易潮濕，可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙，但覆蓋物不可太大，否則會(huì)影響上下層蒸汽暢流；也可將4個(gè)菌種袋的棉塞并攏，棉塞向下一同塞到4個(gè)菌種袋的空隙中，這樣塑料袋規(guī)格要加長(zhǎng)，但防潮效果良好。

　　(2)及時(shí)滅菌：隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時(shí)間越短越好，以免雜菌自繁。大規(guī)模時(shí)，要分鍋滅菌。

　　(3)攻頭：指開(kāi)始滅菌時(shí)要大火猛燒。從開(kāi)始滅菌到溫度達(dá)100℃，歷時(shí)越短越好，zui多不能超過(guò)2小時(shí)，以免長(zhǎng)時(shí)間高溫高濕造成雜菌自繁。當(dāng)然，要做到這一點(diǎn)還取決于滅菌鍋的保溫保氣性能。

　　(4)控中間：指鍋體下部溫度達(dá)到100~C后，控制火勢(shì)燒穩(wěn)火，維持8～10小時(shí)。此間，溫度不可回落，滅菌操作者要堅(jiān)守崗位，不能因通宵滅菌、疲勞或其他原因而懈怠，引起溫度回落。另外，常壓滅菌為了避免燒干應(yīng)注意及時(shí)向蒸發(fā)鍋內(nèi)補(bǔ)充水，但補(bǔ)水不能造成鍋內(nèi)水停止沸騰，可考慮補(bǔ)充沸水或微量連續(xù)補(bǔ)水。可見(jiàn)，要想節(jié)省燃料，又要做到上述這些，建造一個(gè)保溫、保汽性能良好的滅菌鍋十分重要。

　　(5)保尾：指滅菌結(jié)束前要再一次大火猛燒。目的在于加大蒸汽量，滅菌結(jié)束后打開(kāi)柜門(mén)時(shí)有大量蒸汽冒出，帶走棉塞濕氣。但此時(shí)要將連體滅菌鍋中蒸發(fā)鍋內(nèi)的水排干。在開(kāi)門(mén)時(shí)先將門(mén)拉開(kāi)一條縫隙散氣，烘干棉塞，避免冷熱接觸產(chǎn)生冷凝水使棉塞受潮。