綜合微生物的培養方法,包括以下步驟:
(1)前期準備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設備和材料;
(2)按比例配制培養材料;
(3)導入曝氣,進(jìn)行繁殖培養;
(4)取液觀(guān)察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養;
(5)分離并檢測;
(6)取液儲存;通過(guò)該綜合微生物培養方法簡(jiǎn)單可操作性強,培養的綜合微生物均在3代以?xún)?,菌?lèi)穩定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規格參數:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號 |
蛹蟲(chóng)草(北冬蟲(chóng)夏草,北蟲(chóng)草)(斜面)說(shuō)明書(shū) | Cordyceps | EY-J963676 |
資源名稱(chēng): 蛹蟲(chóng)草(北冬蟲(chóng)夏草,北蟲(chóng)草)(斜面)
種屬: Cordyceps militaris
提供形式: 斜面培養物,凍干物
安全等級: 1
模式菌株: no
應用領(lǐng)域: 研究;。保健、藥用,適合液體發(fā)酵菌絲體。
培養基: 綜合PDA瓊脂:馬鈴薯提取液 1.0L,葡萄糖 20.0g,KH2PO4 3.0g,MgSO4.7H2O 1.5g,1 微量,瓊脂 15.0g,pH6.0。
生長(cháng)條件: 25℃,好氧
生長(cháng)特性: 15天長(cháng)滿(mǎn)斜面,菌絲潔白、濃密、豐厚、菌絲絨毛狀。液體深層發(fā)酵溫度23-25℃,pH值為5.5-7,發(fā)酵周期3-4天。
存儲條件: 2-8℃。液氮超低溫凍結法;定期移植法
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(cháng)穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內,然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線(xiàn)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養:
⒈ 孢子制備
⑴ 放線(xiàn)菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養基,培養基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養環(huán)境,不利于放線(xiàn)菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養可直接或間接誘導孢子形成。放線(xiàn)菌斜面的培養溫度大多數為28 ℃,少數為37 ℃,培養時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養,一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產(chǎn)品為培養基。這是由于這些農產(chǎn)品中的營(yíng)養成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類(lèi)培養基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25~28 ℃,培養時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jì)杉壟囵B,有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(cháng)。原則上各種營(yíng)養成分不宜過(guò)濃,子瓶培養基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養后形成大量的菌絲,這樣的種子稱(chēng)為一級種子,把一級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱(chēng)為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內,經(jīng)過(guò)培養形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱(chēng)為二級種子,將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱(chēng)為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱(chēng)為四級發(fā)酵。
Bacillus│pocheonensis 中文名稱(chēng):抱川芽孢桿菌Bacillus│pocheonensis分離基物:樣/上層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:潛在石油烴類(lèi)降解菌/生物活性物質(zhì)篩選培養方法培養基:472生長(cháng)條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Stappia│slulata 中文名稱(chēng):星形斯塔普氏菌Stappia│slulata分離基物:樣/上層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:潛在石油烴類(lèi)降解菌/生物活性物質(zhì)篩選培養方法培養基:472生長(cháng)條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:95%,含碳穩定劑
Marinomonas│communis 中文名稱(chēng):普遍海單胞菌Marinomonas│communis分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:潛在石油烴類(lèi)降解菌/生物活性物質(zhì)篩選培養方法培養基:472生長(cháng)條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:95%,含碳穩定劑
Aurantimonas│sp. 中文名稱(chēng):橙色單胞菌Aurantimonas│sp.分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:石油烴類(lèi)降解菌/海洋污染物生物修復/生物活性物質(zhì)篩選培養方法培養基:472生長(cháng)條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:95%,含碳穩定劑
Brucella│sp. 中文名稱(chēng):布魯氏桿菌Brucella│sp.分離基物:沉積物/近海沉積物提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養方法培養基:1001生長(cháng)條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Streptomyces│spinoverrucosus 中文名稱(chēng):疣鏈霉菌Streptomyces│spinoverrucosus分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應用領(lǐng)域:生物活性微生物/抗腫瘤活性培養方法培養基:12生長(cháng)條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Streptomyces│gougerotii 中文名稱(chēng):古熱羅氏鏈霉菌Streptomyces│gougerotii分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應用領(lǐng)域:生物活性微生物/抗腫瘤活性培養方法培養基:12生長(cháng)條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Streptomyces│atrovirens 中文名稱(chēng):暗黑微綠鏈霉菌Streptomyces│atrovirens分離基物:土壤/近海紅樹(shù)林土壤提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:可用于抗菌活性及抗腫瘤活性研究培養方法培養基:12生長(cháng)條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:99%
蛹蟲(chóng)草(北冬蟲(chóng)夏草,北蟲(chóng)草)(斜面)說(shuō)明書(shū)ROS/c ros 活性氧簇ROS抗體甘草查爾BN-Boc-N'-Cbz-L-賴(lài)氨Mouse TPS (Tryptase) ELISA Kit
RPS6 S6核糖體蛋白抗體甘草查爾CN-Boc-L-賴(lài)氨甲酯鹽鹽Mouse MMP-10 (Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) 磷化S6核糖體蛋白抗體蓮心高鹽三異叉基膦Mouse MMP-12 (Matrix Metalloproteinase 12) ELISA Kit
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) 磷化S6核糖體蛋白抗體蓮心雙十烷基二甲基Mouse MMP-13 (Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit
Rb/P105 RB 成視網(wǎng)膜細胞瘤抑癌蛋白抗體芳樟雙十烷基二甲基Mouse sICAM-1/CD54 (Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1) ELISA Kit
phospho-Rb/p105-Rb(Ser780) 磷化成視網(wǎng)膜細胞瘤抑癌蛋白抗體木蘭花2--6-基芐胺Mouse ANG (Angiogenin) ELISA Kit
RRAD RRAD抗體甲基2--6-基芐胺Mouse ACTH (Adrencocorticotropic Hormone) ELISA Kit
Rsk2/MAPKAP Kinase 1b 核糖體S6激酶RSK2抗體甲基原2--6-基芐胺Mouse OPG (Osteoprotegerin) ELISA Kit