此法采用定量夾心酶聯(lián)免疫技術(shù)?？贵w具體為WNT6已經(jīng)被預先涂到微孔板。標準和樣品吸入井和任何WNT6目前被綁定的固定化抗體。共軛的抗體特異性WNT6除去任何未結合的物質(zhì)后，加入到孔中?？沟鞍坠曹椀睦备^(guò)氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經(jīng)過(guò)洗滌，以除去任何未結合的抗蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，顯色成比例的量的初始步驟中的約束的WNT6。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度。ELISA試劑盒

   血清：使用血清分離管（SST）和全血標本在室溫下兩小時(shí)或4℃過(guò)夜℃，然后離心15分鐘，在1000×g下。刪除上清即可檢測，或分裝和店內樣品在-20°C或-80°C。但應避免反復凍融循環(huán)。

此法具有較高的靈敏度和特異性好，檢測鼠標WNT6。觀(guān)察鼠標WNT6和類(lèi)似物之間無(wú)顯著(zhù)交叉反應或干擾。

精度： 

批內精密度（內檢測精度）：CV％<8％

三種已知濃度的樣品進(jìn)行了測試20次在一個(gè)平板上進(jìn)行評估。

間精密度（精密檢測間）：CV％<10％

已知的三個(gè)樣本20檢測到的濃度進(jìn)行了測試評估。

樣品采集和存儲：

等離子：采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血劑。在2-8°C在30分鐘內收集離心15分鐘，1000×G。即可檢測，或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應避免反復凍融循環(huán)。

檢測程序：

在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據建議，所有樣品和標準來(lái)測定一式兩份。

1。準備好所有試劑，工作標準和樣品在前面的章節中。

2。請確定井數的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表

。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí)，在37℃下一盤(pán)布局記錄標準和樣品檢測。

4。每孔中取出的液體，不洗。

5。向每孔中加入100μl抗體（1倍）。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí)，在37℃下（抗體（1X）可能會(huì )出現混濁。預熱至室溫，輕輕混勻，直到出現均勻解決方案。）

6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復該過(guò)程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。

7。向每孔中加入100μl的HRP-抗蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí)，在37℃下

8。重復的愿望/洗滌過(guò)??程中，在步驟6的5倍。

9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光

10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動(dòng)酶標板，以確保充分混合。

11。在5分鐘內，設置至450nm，使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長(cháng)校正，設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長(cháng)在450nm處的讀數減去讀數。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數直接，可能會(huì )比較高，不太準確。

計算結果：

建議使用專(zhuān)業(yè)的軟“曲線(xiàn)專(zhuān)家1.3”的標準曲線(xiàn)。
平均每個(gè)標準和樣品的重復讀數和平均減去零標準的光學(xué)密度。

標準曲線(xiàn)，通過(guò)減少使用能產(chǎn)生四參數邏輯（4-PL）的曲線(xiàn)擬合的計算機軟件的數據。作為一種替代方法，建立標準曲線(xiàn)，對在y-軸的濃度通過(guò)繪制在x-軸為每個(gè)標準的平均吸光度，并繪制一個(gè)通過(guò)在曲線(xiàn)圖上的點(diǎn)的zui擬合曲線(xiàn)。該數據可以通過(guò)繪制的WNT6濃度與日志的OD值和擬合直線(xiàn)的日志，可以通過(guò)回歸分析確定線(xiàn)性化。此過(guò)程會(huì )產(chǎn)生足夠的，但不太的適合的數據。

如果已稀釋的樣品，從標準曲線(xiàn)上讀出的濃度必須乘以稀釋因子。ELISA試劑盒