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細胞的培養方法

點(diǎn)擊次數:872 更新時(shí)間:2016-04-06

    以前認為紅細胞、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等血細胞都屬終末分化細胞,很難在體外培養生長(cháng)或僅能短期培養而不能傳代,近年來(lái)由于淋巴細胞培養基技術(shù)的發(fā)展,已有血細胞培養成功的報道,正常血細胞在體外培養生長(cháng)時(shí)間短,只有白血病細胞,血友病細胞、淋巴瘤細胞可培養成功并建立細胞系,但多半為EB病毒等致瘤病毒引起的轉化細胞,(EBNA檢查陽(yáng)性),二甲基亞砜(DMSO)處理也可誘導這些細胞分化發(fā)生逆轉,表現為正常細胞。所建立的細胞系多半為單核細胞系、B淋巴細胞系、T淋巴細胞系,只在IL-2產(chǎn)品問(wèn)世后,T細胞才可在體外建系、建株。

   血細胞可從外周血中用梯度液通過(guò)離心分層后分離獲得。也可從脾臟、扁桃體、淋巴結中用機械法切碎過(guò)篩分離獲得淋巴細胞,從腹腔刺激后的沖洗液中可獲得大量的單核-巨噬細胞,從骨髓中可以獲得前提血細胞,并可培養生長(cháng)。加入生長(cháng)因子或某些物質(zhì)有利于細胞純化并促進(jìn)分化和生長(cháng)繁殖,例如在淋巴細胞中加入IL-2(TCGF),可促進(jìn)T細胞生長(cháng),建立T淋巴細胞系。在多發(fā)性骨髓瘤細胞(B細胞)培養中,加B細胞生長(cháng)因子,可建立B細胞系;加入IL-6(或正常淋巴細胞培養48h的培養上清中的IL6)可使B細胞在體外培養,建立了IL-6依賴(lài)的B9細胞系。在骨髓單個(gè)核細胞培養中加入二羥基3,可使單個(gè)核細胞分化為成骨細胞及破骨細胞。

   人臍帶血來(lái)源方便,采集容易,對母嬰均無(wú)傷害。近年來(lái)研究表明,臍帶血的血漿中富含許多高水平的造血活性物質(zhì),具有刺激和促進(jìn)骨髓造血干/祖細胞增殖、分化和再植能力的功能,是造血生長(cháng)因子的重要來(lái)源。

   臍帶血中富含類(lèi)似于骨髓的造血干細胞,其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖細胞,比骨髓更原始,具有很強的自我復制和再植能力。臍帶血中還含有類(lèi)似于骨髓的基質(zhì)細胞,對骨髓造血具有支持作用,在體外培養擴增中具有更大的增值能力,是造血干細胞的理想來(lái)源,已被應用于Fanconi貧血、某些白血病和惡性腫瘤的治療,并容易獲得骨髓造血功能的重建。

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