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酶聯(lián)免疫試劑盒吸附試驗

點(diǎn)擊次數:1688 更新時(shí)間:2016-12-01

酶聯(lián)免疫試劑盒吸附試驗

一  酶聯(lián)免疫試劑盒用于標記的酶 用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產(chǎn)物易于顯現;能商品化。目前應用較多的有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應用zui廣。
1.辣根過(guò)氧化物酶(HRP) 過(guò)氧化物酶廣泛分布于植物中,辣根中含量zui高,從辣根中提取的稱(chēng)辣根過(guò)氧化物酶(HRP),是由無(wú)色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構成的一種糖蛋白(含糖量18%),分子量約40 000,約由300個(gè)氨基酸組成,等電點(diǎn)為pH 3-9,催化反應的zui適pH值因供氫體不同而稍有差異,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。酶蛋白和輔基的zui大吸收光譜分別為275nm和403nm。
酶的純度以RZ表示:RZ=OD403/OD275
純酶的RZ多在3.0以上,zui高為3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶,非酶蛋白約占 75%,不能用于標記。RZ在2.5以上者方可用于標記。HRP的作用底物為過(guò)氧化氫,催化反應時(shí)的供氫體有幾種:(1)鄰苯二胺(OPD),產(chǎn)物為橙色,可溶性,敏感性高,zui大吸收值在490nm,可用肉眼觀(guān)察判別,容易被濃硫酸終止反應,顏色可在數小時(shí)內不改變,是目前國內ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)中zui常用的一種;(2)聯(lián)大茴香胺(OD),產(chǎn)物為橘黃色,zui大吸收值在400nm,顏色較穩定;(3)5-氨基水楊酸(5-AS):產(chǎn)物為深棕色,zui大吸收值在450nm,部分溶解,敏感性較差;(4)鄰聯(lián)甲苯胺(OT)產(chǎn)物為藍色,zui大吸收值在630nm,部分溶解,不穩定,不耐酸,但反應快,顏色明顯。
2.堿性磷酸酶 系從小牛腸粘膜和大腸桿菌中提取,酶聯(lián)免疫試劑盒由多個(gè)同功酶組成。它們的底物種類(lèi)很多,常用者為硝基苯磷酸鹽,廉價(jià)無(wú)毒性。酶解產(chǎn)物呈黃色,可溶,zui大吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反應系統中,37℃1分鐘水解1μg磷酸苯二鈉為一個(gè)單位。

二  基本原理 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結合,此種結合不會(huì )改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型,出現顏色反應。因此,可通過(guò)底物的顏色反應來(lái)判定有無(wú)相應的免疫反應,顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過(guò)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)檢測儀進(jìn)行定量測定,這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái),使ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    英文名稱(chēng):    Human Varicella zoster virus IgM,VZV IgM ELISA Kit    規格:    96T/48T
人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA試劑盒    進(jìn)口/原裝    英文名稱(chēng):    Human Varicella zoster virus IgG,VZV-IgG ELISA Kit    規格:    96T/48T
人軍團菌抗體IgA(LP Ab-IgA)ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human Legionella antibody IgA,LP Ab-IgA ELISA Kit    規格:    96T/48T
人軍團菌抗體IgM(LP Ab-IgM )ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human Legionella antibody IgM,LP Ab-IgM ELISA Kit    規格:    96T/48T
人軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    英文名稱(chēng):    Human Legionella antibody IgG,LP Ab-IgG ELISA Kit    規格:    96T/48T
人腮腺炎病毒IgM ELISA試劑盒    進(jìn)口/原裝    英文名稱(chēng):    Human paramyxovirus parotitis IgM ELISA Kit    規格:    96T/48T
人腮腺炎病毒IgG ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human paramyxovirus parotitis IgG ELISA Kit    規格:    96T/48T
人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human epstein-barr virus IgM,EBv IgM ELISA Kit    規格:    96T/48T
人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    英文名稱(chēng):    Human epstein-barr virus IgA,EBv IgA ELISA Kit    規格:    96T/48T
人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒    進(jìn)口/原裝    英文名稱(chēng):    Human epstein-barr virus IgG,EBv IgG ELISA Kit    規格:    96T/48T
人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human dengue fever antibody,DF ELISA Kit    規格:    96T/48T
人流感病毒抗體IgG(FLU)ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human Influenza viruses IgG,FLU ELISA Kit    規格:    96T/48T
人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    英文名稱(chēng):    Human Adenovirus IgM,ADV-IgM ELISA Kit    規格:    96T/48T
人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA試劑盒    進(jìn)口/原裝    英文名稱(chēng):    Human Adenovirus IgG,ADV-IgG ELISA Kit     規格:    96T/48T
人輪狀病毒(RV)IgM ELISA試劑盒    *    英文名稱(chēng):    Human Rotavirus,RV IgM ELISA Kit    規格:    96T/48T

 

 

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