綜合微生物的培養方法,包括以下步驟:
(1)前期準備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設備和材料;
(2)按比例配制培養材料;
(3)導入曝氣,進(jìn)行繁殖培養;
(4)取液觀(guān)察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養;
(5)分離并檢測;
(6)取液儲存;通過(guò)該綜合微生物培養方法簡(jiǎn)單可操作性強,培養的綜合微生物均在3代以?xún)?,菌?lèi)穩定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規格參數:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號 |
青春雙歧桿菌規格 | Bifidobacterium adolescentis | EY-J963222 |
資源名稱(chēng): 青春雙歧桿菌
種屬: Bifidobacterium adolescentis
提供形式: 凍干物
安全等級: 1
模式菌株: yes
培養基: BBL液體培養基:蛋白胨 15.0g,葡萄糖 20.0g,酵母浸膏 20.g,可溶性淀粉 0.5g, 5.0g,L-半 0.5g,番茄浸粉 5.0g,肝浸粉 2.0g,吐溫80 1.0g,蒸餾水1L,pH6.6-7.0。115℃,20min。
生長(cháng)條件: 37℃,厭氧
存儲條件: 真空冷凍干燥法
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(cháng)穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內,然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線(xiàn)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養:
⒈ 孢子制備
⑴ 放線(xiàn)菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養基,培養基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養環(huán)境,不利于放線(xiàn)菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養可直接或間接誘導孢子形成。放線(xiàn)菌斜面的培養溫度大多數為28 ℃,少數為37 ℃,培養時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養,一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產(chǎn)品為培養基。這是由于這些農產(chǎn)品中的營(yíng)養成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類(lèi)培養基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25~28 ℃,培養時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jì)杉壟囵B,有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(cháng)。原則上各種營(yíng)養成分不宜過(guò)濃,子瓶培養基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養后形成大量的菌絲,這樣的種子稱(chēng)為一級種子,把一級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱(chēng)為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內,經(jīng)過(guò)培養形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱(chēng)為二級種子,將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱(chēng)為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱(chēng)為四級發(fā)酵。
Eupenicillium│parvum 中文名稱(chēng):微細正青霉Eupenicillium│parvum分離基物:土壤提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養方法培養基:CM0072生長(cháng)條件:25℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Talaromyces│ruber 中文名稱(chēng):紅色籃狀菌Talaromyces│ruber分離基物:植物塊根提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應用領(lǐng)域:分類(lèi)學(xué)研究。培養方法培養基:CM0077生長(cháng)條件:25℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Eupenicillium│ochrosalmoneum 中文名稱(chēng):赭鮭色正青霉Eupenicillium│ochrosalmoneum分離基物:玉米提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養方法培養基:CM0072生長(cháng)條件:25℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Salmonella│enrica subsp. enrica 中文名稱(chēng):腸沙門(mén)氏菌腸亞種Salmonella│enrica subsp. enrica提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領(lǐng)域:研究、質(zhì)量控制培養方法培養基:CM0002生長(cháng)條件:36℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Morganella morganii 中文名稱(chēng):摩氏摩根氏菌Morganella morganii提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:研究、質(zhì)量控制培養方法培養基:營(yíng)養肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長(cháng)條件:37℃,好氧,24h。存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Salmonella│enrica subsp. enrica serotype Wandsworth 中文名稱(chēng):腸沙門(mén)氏菌腸亞種旺茲沃思血清型Salmonella│enrica subsp. enrica serotype Wandsworth提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領(lǐng)域:研究、質(zhì)量控制培養方法培養基:CM0002生長(cháng)條件:36℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:99%
Tuberibacillus│calidus 中文名稱(chēng):熱生腫塊芽孢桿菌Tuberibacillus│calidus分離基物:堆肥提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養方法培養基:CM0998生長(cháng)條件:50℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Bifidobacrium│bifidum 中文名稱(chēng):兩歧雙歧桿菌Bifidobacrium│bifidum分離基物:成年人腸道提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領(lǐng)域:用于益生菌類(lèi)食品。培養方法培養基:CM0791生長(cháng)條件:37℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:97%
青春雙歧桿菌規格葉測定培養基人肺成纖維細胞肝內膽管上皮細胞ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22) ??窠?jīng)素(35肽)
泛測定培養基人支氣管平滑肌細胞胃黏膜上皮ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ??窠?jīng)素(35肽)
游離測定培養基人氣管平滑肌細胞腎實(shí)質(zhì)細胞ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln9) ??窠?jīng)素(35肽)
肌測定培養基人支氣管成纖維細胞腎系膜細胞ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11) ??窠?jīng)素(35肽)
多價(jià)蛋白胨酵母膏(PY)培養基人骨骼肌細胞膀胱上皮細胞rHBcAg 重組乙肝病核心抗原
營(yíng)養肉湯(不含糖)人骨骼肌衛星細胞膀胱平滑肌細胞rHBeAg(Hepatitis B Virus E Antigen protein) 重組乙肝病e抗原
亮綠乳糖培養基(BGL)人骨骼肌成肌細胞腎動(dòng)脈內皮細胞rDen(rh-Dengue Virus) 多價(jià)重組人登革熱病診斷抗原
腸道菌增菌肉湯(EE)人腎上腺皮質(zhì)細胞腎動(dòng)脈平滑肌細胞rDen-2(rh-Dengue Virus) 重組人登革熱病2型診斷抗原