細胞名稱(chēng) 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swissalbino
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣
生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)
特征特性: 3T3細胞株是1962年TodaroG和GreenH從分離的瑞士小鼠胚胎中建立的;該細胞的生長(cháng)受接觸性抑制,匯合狀態(tài)的單層細胞密度為40000個(gè)細胞/平方厘米;檢測結果顯示該細胞鼠痘病毒陰性;在塑料瓶中生長(cháng)較好,在某些玻璃表面上可能狀態(tài)不佳;細胞生長(cháng)飽和時(shí)其密度可以達到約50000cells/cm2。
培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(cháng)特性 | 貨號 |
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swissalbino | 貼壁生長(cháng) | EY-X63212 |
?
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過(guò)大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀(guān)察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實(shí)驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng),未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實(shí)驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
大鼠垂體瘤細胞;GH3形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 疏松貼壁,有漂浮的細胞簇Human IFN-γ ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swissalbino形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat NGAL ELISA KIT
二氫還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat IL-17 ELISA KIT
小鼠垂體瘤細胞;GT1-1形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Boviene IL-1β ELISA Kit
人前列腺癌細胞;DU145[DU145;DU-145]形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human Insulin ELISA KIT
人胚腎細胞;293[HEK-293]形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human IL-10 ELISA KIT
人肺癌細胞;A549[A-549]形態(tài)特性: 上皮樣;多角形生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human TGF-β 1 ELISA KIT
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human C-Reactive Protein ELISA KIT
人乳腺癌細胞;MCF7形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat MIP-1α ELISA KIT
人細胞;HeLa形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human IL-1F9 ELISA KIT
人乳腺癌細胞;MDA-MB-453形態(tài)特性: 上皮樣;多角形生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat IgG(Total) ELISA KIT
小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞與大鼠膠質(zhì)瘤細胞之融合細胞;NG108-15[108CC15]形態(tài)特性: 扁平;圓形;直徑10~100mm生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat SCF ELISA KIT
小鼠畸胎瘤細胞;P19形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat MIP-2 ELISA KIT
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞;NTERA-2形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human IL-18 ELISA KIT
人卵巢畸胎瘤細胞;PA-1形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rat IL-10 ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Mouse IL-12p40 ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swissalbino小鼠17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒11-DH-TXB2ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒12-HETEELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒15-LO/LOXELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠L苯解氨酶(PAL)ELISA試劑盒15-LO/LOXELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠可溶性白細胞分化抗原30配體(sCD30L)ELISA試劑盒15-LO/LOXELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒16-αOHE-1ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒16-αOHE-1ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒17-KSELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。