實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過(guò)大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(cháng)特性 | 貨號 |
社鼠皮膚成纖維樣細胞;CWBRS2 | 貼壁生長(cháng) | EY-X63805 |
?
細胞名稱(chēng) 社鼠皮膚成纖維樣細胞;CWBRS2
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣
生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)
特征特性: 該細胞系來(lái)源于一雄性社鼠的耳部皮膚組織。2002年由中國科學(xué)院昆明細胞庫建立。
培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P4
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀(guān)察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實(shí)驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng),未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實(shí)驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
抗連接素抗體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞);YAC-1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Titin antibody
CD19抗體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 小鼠結締組織細胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)形態(tài)特性: 成纖維細胞樣CD19 Antibody
維生素D25檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 人卵巢癌細胞;COC1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Vitamin D25
甘氨脫氫酶檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 大鼠癌細胞;SHZ-88形態(tài)特性: 上皮細胞樣Glycine Dehydrogenase
寡樹(shù)突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 人喉癌上皮細胞;Hep-2形態(tài)特性: 上皮細胞樣MOG-Ab
超廣譜β-內酰胺酶檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12[PC12]形態(tài)特性: 多形態(tài)細胞樣ESBL
鼠疫抗原檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 豬胚胎傳代細胞;ST形態(tài)特性: 上皮細胞樣application estimate
神經(jīng)降壓素前體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 人細胞;HeLa形態(tài)特性: 上皮細胞樣Pro-neurotensin
13(S)-HODE檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21形態(tài)特性: 成纖維細胞樣13(S)-HODE
髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 昆蟲(chóng)卵巢細胞;SF9形態(tài)特性: 圓形,多形myelin oligodendrocyte glycoprotein
NLRP3炎癥小體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 人胚肺二倍體細胞;KMB-17形態(tài)特性: 成纖維細胞樣NLRP3 Inflammasome
解脲支原體IgM抗體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 小鼠骨髓瘤細胞;P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Uu Casset IgM Antibody
Traf2結合蛋白檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 犬腎細胞;MDCK(NBL-2)形態(tài)特性: 上皮細胞樣Traf2 binding protei
補體因子H相關(guān)蛋白1檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 小鼠胚胎成纖維細胞;STO形態(tài)特性: 成纖維細胞樣Complement factor H-related protein 1
14-3-3蛋白檢測試劑盒細胞名稱(chēng): EB病轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣14-3-3 pro
流行性乙型腦炎病IGM抗體檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 小鼠骨髓瘤細胞;P3X63-Ag8.653形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Epidemic encephalitis B IgM Antibody
乙肝兩對半檢測試劑盒細胞名稱(chēng): 人胚肺成纖維細胞;WI-38[WI38]形態(tài)特性: 成纖維細胞樣HBV Casset
社鼠皮膚成纖維樣細胞;CWBRS2BCYE-CYS瓊脂平板(9cm)規格:10個(gè)/包用途:用于軍團菌的選擇性分離培養
/克拉維藥敏紙片規格:75/10 μg/片,20片/瓶拉丁屬名:Cefixime (CFX)
去氧膽鹽枸櫞鹽瓊脂規格:250g用途:用于沙門(mén)氏菌的分離培養
42℃生長(cháng)試驗規格:20支詳情介紹
明膠生化管規格:20支/盒用途:用于變形桿菌檢測
腸道菌富集肉湯培養基(USP)規格:250g用途:用于腸桿菌科細菌的選擇性增菌培養