細胞名稱(chēng) 表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞;293ET
形態(tài)特性: 上皮樣;多角
生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)
特征特性: 該細胞來(lái)源于293細胞,可以表達SV40T和EBNA1。
培養條件: IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium10%FBS
傳代方法: 1:6傳代;2天1次
傳代情況: 不詳
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(cháng)特性 | 貨號 |
表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞;293ET | 貼壁生長(cháng) | EY-X63316 |
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過(guò)大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀(guān)察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實(shí)驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng),未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實(shí)驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
人Ph+急淋白血病細胞系;SUP-B15形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-TRAF3 Polyclonal Antibody
人套細胞淋巴瘤細胞;JeKo-1形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-Phospho-RAF1-S259 Polyclonal Antibody
人肺癌細胞;Calu-1形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-TIMP1 Polyclonal Antibody
人小細胞肺癌細胞;NCI-H446形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁/懸浮生長(cháng),混合Anti-AQP3 Polyclonal Antibody
人肺腺癌細胞;NCI-H1975形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-FAH Polyclonal Antibody
人絨毛膜癌細胞;JEG-3形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-FXR1 Polyclonal Antibody
人內膜癌細胞;RL95-2形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-IKK alpha Polyclonal Antibody
人腎細胞腺癌細胞;ACHN形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-APG4B Polyclonal Antibody
人紅白血病細胞;Kasumi-1形態(tài)特性: 原粒細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-TNFRSF11B Polyclonal Antibody
人神經(jīng)母細胞瘤細胞;SK-N-BE(2)形態(tài)特性: 神經(jīng)母細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-BE1 Polyclonal Antibody
人胰腺癌細胞系;SW1990形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-Desmin Polyclonal Antibody
人大細胞肺癌細胞;NCI-H460[H460]形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-VCAM1 Polyclonal Antibody
人T淋巴細胞白血病細胞;HuT78形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-PLAUR PolycloRnal Antibody
人急性單核細胞白血病單核細胞;AML-193形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-IL17F Polyclonal Antibody
人結直腸癌肺轉移細胞;T84形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-Albumin Polyclonal Antibody
人結直腸腺癌細胞;NCI-H716[H716]形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Anti-PA2G4 Polyclonal Antibody
表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞;293ET大鼠Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒DNP-AbELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒DPDELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒DPDELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠apelin12(AP12)ELISA試劑盒DPDELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒DPDELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒DPDELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒DPPⅣELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒DPPⅣELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。