實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過(guò)大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹：

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細胞名稱(chēng)  大鼠雪旺細胞；RSC96
形態(tài)特性: 神經(jīng)元

生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)

特征特性: RSC96細胞株是原代培養的大鼠雪旺細胞經(jīng)長(cháng)時(shí)間培養后自發(fā)轉化而成的[PubMed:9766530]。2002年十二月提交到ATCC的培養物污染了支原體。其后代通過(guò)BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進(jìn)行支原體檢測。結果都呈陰性。

培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長(cháng)滿(mǎn)。

傳代情況: PN5

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀(guān)察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實(shí)驗。
④如果發(fā)現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落， 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實(shí)驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
freeze-dried細胞名稱(chēng): EB病轉化的人B淋巴細胞；HH-16 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

Penicillium thomii Maire, anamorph細胞名稱(chēng): EB病轉化的人B淋巴細胞；HH-01 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

Chaetomium tenuissimum Sergejeva, teleomorph細胞名稱(chēng): EB病轉化的人B淋巴細胞；KMY1008 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

Homo sapiens, human細胞名稱(chēng): EB病轉化的人B淋巴細胞；KMY1022 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

Salmonella enterica subsp.enterica (e ..細胞名稱(chēng): EB病轉化的人B淋巴細胞；KMY1036 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

Staphylococcus epidermidis (Winslow and Win ..細胞名稱(chēng): EB病轉化的人B淋巴細胞；KMY1002 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

frozen細胞名稱(chēng): 人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞；WPMY-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%

frozen細胞名稱(chēng): 人正常前列腺上皮細胞；RWPE-1 這株細胞的基本培養基作為Invitrogen(GIBCO)提供的kit的部分：角化細胞無(wú)血清培養基K-SFM，kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細胞生長(cháng)所需的兩種添加劑（牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長(cháng)因子EGF）。配制*生長(cháng)培養基，需添加以下成分：0.05mg/mlBPE–隨K-SFM提供5ng/mlEGF-隨K-SFM提供。

dried細胞名稱(chēng): 人臍靜脈細胞融合細胞；EA.hy926 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱(chēng): 人肝永生化細胞；THLE-3 CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培養基(目錄號CC3170)。套裝包含了500毫升基本培養基及分別凍存的添加劑，我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。

Verticillium fungicola (Preuss) Hassebrauk, ..細胞名稱(chēng): 人胚肺成纖維細胞；IMR-90 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

Marchandiomyces corallinus (Roberge) Dieder ..細胞名稱(chēng): 人胚胎肺成纖維細胞；WI-38 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱(chēng): 小鼠胰島內皮細胞；MS1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%

Homo sapiens, human細胞名稱(chēng): 小鼠腎小球系膜細胞；SV40MES13 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%；14mMHEPES

Rattus norvegicus, rat spleen細胞名稱(chēng): 小鼠胚胎成纖維細胞；Psi2DAP DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

dried細胞名稱(chēng): 小鼠胚胎成纖維細胞；3T3-L1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)牛血清，10%
大鼠雪旺細胞；RSC96β(β-HCG)ELISA試劑盒PL/FbnELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

(HCG)ELISA試劑盒PL12/AlaRSELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

人C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

人胰島素(INS)ELISA試劑盒PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

人新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

人游離*狀腺原氨(Free-T3)ELISA試劑盒PLAPELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

人游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒PLAUR/uPARELISAkit產(chǎn)品規格:48T/96T。

人甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒PLAUR/uPARELISAkit產(chǎn)品規格:48T/96T。