產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
細胞名稱(chēng) 耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16
形態(tài)特性: 上皮樣;多角
生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)
特征特性: 對VP16耐藥,間歇用藥。
培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)?
產(chǎn)品名稱(chēng) | 耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16 |
生長(cháng)特性 | 貼壁生長(cháng) |
貨號 | EY-X63258 |
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現貨,超低比價(jià),產(chǎn)品名稱(chēng)貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。
實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過(guò)大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶?jì)?,?7℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長(cháng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀(guān)察 在倒置顯微鏡下觀(guān)察并記錄細胞的生長(cháng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀(guān)察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個(gè)25cm2培養瓶中,每?jì)尚r(shí)隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ,計算貼壁率。
1.6 生長(cháng)曲線(xiàn) 取指數生的細胞用消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。
培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長(cháng)至覆蓋培養板底部2/3面積時(shí),將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
小鼠淋巴瘤細胞;L5178YTK+/-clone(3.7.2C)形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Canine (dog) IL-13 ELISA Kit
小鼠癌細胞;4T1形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Bovine TLR-9 ELISA Kit
雞淋巴瘤細胞;DT40形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)細胞程序性死亡-配體1酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
大鼠肝癌細胞;CBRH-7919[CBRH7919]形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Goat IgE ELISA Kit
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12[PC12]形態(tài)特性: 多角形生長(cháng)特性: 疏松貼壁,有多細胞聚集體Sheep IgM ELISA Kit
大鼠肝癌細胞;RH-35形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Human Periostin ELISA KIT
大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞;C6形態(tài)特性: 成纖維細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Canine (dog) IL-17 A ELISA Kit
大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞;AR42J形態(tài)特性: 上皮細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Canine (dog) BMP1 ELISA Kit
大鼠嗜性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3形態(tài)特性: 成纖維細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Canine (dog) TLR3 ELISA Kit
淋巴細胞;1301形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Rabbit CD73/5'-Nueleotidase ELISA Kit
斑馬魚(yú)尾鰭細胞;AB.9形態(tài)特性: 生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rabbit Angiostatin ELISA Kit
小鼠胚胎內層細胞團;R1形態(tài)特性: 干細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Rabbit PIGF ELISA Kit
小鼠胚胎內層細胞團;R1/E形態(tài)特性: 干細胞生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Bovine IL-6 ELISA Kit
小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞);YAC-1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Rabbit MMP-7 ELISA Kit
小鼠結締組織細胞胸苷激酶缺陷株;L-M(TK-)形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)Feline PIGF ELISA Kit
卵巢癌細胞;COC1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Feline IL-31 ELISA Kit
耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16小鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒ATELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒ATGA/TGABELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)ELISA試劑盒ATGAELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA試劑盒ATGELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)ELISA試劑盒ATMA/TMABELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒ATMELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠肝脂酶(HL)ELISA試劑盒ATRELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。
小鼠β內啡肽受體(β-EPR)ELISA試劑盒ATRELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。