實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過(guò)大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹：

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細胞名稱(chēng)  原位胰腺腺癌細胞；BxPC-3
形態(tài)特性: 上皮樣，多角形

生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)

特征特性: 該細胞不表達囊性纖維化跨膜傳導調節因子(CFTR)；CFTR陽(yáng)性的細胞株是Capan-1。

培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法: 1:3~1:6傳代；每周2~3次換液。

傳代情況: C5

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 培養法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀(guān)察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實(shí)驗。
④如果發(fā)現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落， 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實(shí)驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
胚腎293轉染細胞；HEK293-RANK&NF-κB-RE-luc形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)PE標記的兔抗小鼠k鏈

小鼠雜交瘤細胞株；4C11形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE標記的羊抗小鼠IgG

肺腺癌細胞；LCAd-001形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)PE-Cy3標記的兔抗抗體IgG

小鼠雜交瘤細胞株；3H6形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE-Cy3標記的兔抗小鼠k鏈

歐洲鰻鱺腎臟細胞系；EK形態(tài)特性: 上皮樣生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)PE-Cy5.5標記的兔抗猴IgM

小鼠雜交瘤細胞株；CD127-2F8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE-CY5標記的羊抗人IgM

小鼠雜交瘤細胞株；2G3形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE-Cy7標記的兔抗豚鼠IgG

花鱸腦細胞系；LMB-S形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Alexa Fluor 647標記的羊抗豚鼠IgG

小鼠雜交瘤細胞株；6G12形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE標記的羊抗豚鼠IgG

小鼠雜交瘤細胞株；PAG-H4形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Alexa Fluor 350標記的兔抗羊IgM

小鼠雜交瘤細胞株；PAG-G7形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE標記的兔抗豚鼠IgG

小鼠雜交瘤細胞株；5A3形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)PE-CY5標記的兔抗羊IgM

小鼠雜交瘤細胞株；6B5形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgG-Fc

小鼠雜交瘤細胞株；4G10形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-GZMA Polyclonal Antibody

小鼠雜交瘤細胞株；3H8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-CA3 Polyclonal Antibody

小鼠雜交瘤細胞株；20F8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長(cháng)特性: 懸浮生長(cháng)Anti-PRL Polyclonal Antibody
原位胰腺腺癌細胞；BxPC-3豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒IL-10ELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒IL-10ELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒IL-10ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬乙酰膽受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒IL-10ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒IL-10ELISAKit產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒IL-10ELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬血清一氧化氮(NO)ELISA試劑盒IL-11ELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。

豬(HYD)ELISA試劑盒IL-11ELISAKIT產(chǎn)品規格:48T/96T。